Ի՞նչ է պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը:

Պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզ

Գելային էլեկտրոֆորեզը հիմնարար տեխնիկա է կենսաբանական առարկաների լաբորատորիաներում, որը թույլ է տալիս առանձնացնել մակրոմոլեկուլները, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և սպիտակուցները: Տարբեր տարանջատման միջավայրեր և մեխանիզմներ թույլ են տալիս այս մոլեկուլների ենթաբազմությունները ավելի արդյունավետ կերպով առանձնացնել՝ օգտագործելով դրանց ֆիզիկական բնութագրերը: Հատկապես սպիտակուցների համար պոլիակրիլամիդային գելային էլեկտրոֆորեզը (PAGE) հաճախ ընտրության մեթոդ է:

PAGE-ը տեխնիկա է, որն առանձնացնում է մակրոմոլեկուլները, ինչպիսիք են սպիտակուցները՝ հիմնվելով նրանց էլեկտրոֆորետիկ շարժունակության վրա, այսինքն՝ անալիտների՝ դեպի հակառակ լիցք ունեցող էլեկտրոդ շարժվելու ունակության վրա: PAGE-ում դա որոշվում է մոլեկուլի լիցքով, չափով (մոլեկուլային քաշով) և ձևով: Անալիտները շարժվում են պոլիակրիլամիդ գելի մեջ ձևավորված ծակոտիների միջով: Ի տարբերություն ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի, սպիտակուցները տարբերվում են՝ կախված ամինաթթուներից, որոնք կարող են ազդել դրանց աշխատանքի վրա: Ամինաթթուների լարերը կարող են նաև ձևավորել երկրորդական կառուցվածքներ, որոնք ազդում են դրանց ակնհայտ չափի վրա և, հետևաբար, ինչպես են նրանք կարողանում շարժվել ծակոտիների միջով: Հետևաբար, երբեմն կարող է ցանկալի լինել էլեկտրոֆորեզից առաջ սպիտակուցների դենատուրացիա՝ դրանք գծայինացնելու համար, եթե պահանջվում է չափի ավելի ճշգրիտ գնահատում:

SDS ԷՋ

Նատրիում-դոդեցիլ սուլֆատ պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը տեխնիկա է, որն օգտագործվում է 5-ից 250 կԴա զանգվածով սպիտակուցի մոլեկուլները առանձնացնելու համար: Սպիտակուցները բաժանվում են բացառապես իրենց մոլեկուլային քաշի հիման վրա: Նատրիումի դոդեցիլ սուլֆատը՝ անիոնային մակերևութային ակտիվ նյութ, ավելացվում է գելերի պատրաստման մեջ, որը քողարկում է սպիտակուցի նմուշների ներքին լիցքերը և տալիս դրանց լիցք և զանգվածի հարաբերակցությունը: Պարզ բառերով ասած՝ այն դենատուրիզացնում է սպիտակուցները և նրանց բացասական լիցք է հաղորդում։

Մայրենի ԷՋ

Native PAGE-ը տեխնիկա է, որն օգտագործում է չդենատուրացված գելեր՝ սպիտակուցների տարանջատման համար: Ի տարբերություն SDS PAGE-ի, գելերի պատրաստման մեջ դենատուրացնող միջոց չի ավելացվում: Արդյունքում սպիտակուցների տարանջատումը տեղի է ունենում սպիտակուցների լիցքի և չափի հիման վրա։ Այս տեխնիկայում սպիտակուցների կոնֆորմացիան, ծալովի և ամինաթթուների շղթաներն այն գործոններն են, որոնցից կախված է բաժանումը: Սպիտակուցները չեն վնասվում այս գործընթացում և կարող են վերականգնվել տարանջատման ավարտից հետո:

Ինչպե՞ս է գործում պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը (PAGE):

PAGE-ի հիմնական սկզբունքն է առանձնացնել անալիտները՝ դրանք անցկացնելով պոլիակրիլամիդ գելի ծակոտիներով՝ օգտագործելով էլեկտրական հոսանք: Դրան հասնելու համար ակրիլամիդ-բիսակրիլամիդ խառնուրդը պոլիմերացվում է (պոլիակրիլամիդ)՝ ավելացնելով ամոնիումի պերսուլֆատ (APS): Ռեակցիան, որը կատալիզացվում է տետրամեթիլէթիլենդիամինի (TEMED) կողմից, ձևավորում է ցանցանման կառուցվածք՝ ծակոտիներով, որոնց միջով անալիտները կարող են շարժվել (Նկար 2): Որքան բարձր է գելի մեջ ներառված ընդհանուր ակրիլամիդի տոկոսը, այնքան փոքր է ծակոտիների չափը, հետևաբար այնքան փոքր են սպիտակուցները, որոնք կկարողանան անցնել միջով: Ակրիլամիդի և բիսակրիլամիդի հարաբերակցությունը նույնպես կազդի ծակոտիների չափի վրա, բայց դա հաճախ պահպանվում է անփոփոխ: Ավելի փոքր ծակոտիների չափերը նաև նվազեցնում են արագությունը, որով փոքր սպիտակուցները կարողանում են շարժվել գելի միջով, բարելավելով դրանց լուծումը և թույլ չտալով, որ դրանք արագորեն դուրս գան բուֆեր, երբ հոսանք է կիրառվում:

Սարքավորումներ պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզի համար

Գել էլեկտրոֆորեզի բջիջ (բաք/խցիկ)
Գելային բաքը պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզի համար (PAGE) տարբերվում է ագարոզայի գելի բայից: Ագարոզայի գելի բաքը հորիզոնական է, մինչդեռ PAGE բաքը ուղղահայաց է: Ուղղահայաց էլեկտրոֆորեզի խցիկով (բաք/խցիկ) բարակ գել (սովորաբար 1,0 մմ կամ 1,5 մմ) լցվում է երկու ապակե թիթեղների միջև և տեղադրվում այնպես, որ գելի հատակը ընկղմվի բուֆերի մեջ մեկ խցիկում, իսկ վերին մասը՝ բուֆերի մեջ: մեկ այլ պալատում: Երբ հոսանք է կիրառվում, մի փոքր քանակությամբ բուֆեր գաղթում է գելի միջով վերին խցիկից դեպի ստորին խցիկ: Ունենալով ուժեղ սեղմակներ, որոնք երաշխավորում են, որ մոնտաժը մնում է ուղղահայաց դիրքում, սարքավորումը հեշտացնում է գելի արագ աշխատանքը՝ հավասարաչափ սառեցմամբ, ինչը հանգեցնում է հստակ շերտերի:

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) արտադրում է մի շարք չափերի պոլիակրիլամիդային գելային էլեկտրոֆորեզի բջիջներ (տանկեր/խցիկներ): DYCZ-20C և DYCZ-20G մոդելները ուղղահայաց էլեկտրոֆորեզի բջիջներ են (տանկեր/խցիկներ) ԴՆԹ-ի հաջորդականության վերլուծության համար: Ուղղահայաց էլեկտրոֆորեզի որոշ բջիջներ (տանկեր/խցիկներ) համատեղելի են բլոտային համակարգի հետ, օրինակ՝ DYCZ-24DN, DYCZ-25D և DYCZ-25E մոդելները համատեղելի են Western Blotting համակարգի մոդելների DYCZ-40D, DYCZ-40G և DYCZ-40F մոդելների հետ, որոնք օգտագործվում են սպիտակուցի մոլեկուլը գելից թաղանթ տեղափոխելու համար։ SDS-PAGE էլեկտրոֆորեզից հետո Western Blotting-ը սպիտակուցային խառնուրդում հատուկ սպիտակուց հայտնաբերելու տեխնիկա է: Դուք կարող եք ընտրել այս blotting համակարգերը ըստ փորձարարական պահանջների:

Էլեկտրոֆորեզի էլեկտրամատակարարում
Գելի գործարկման համար էլեկտրաէներգիա ապահովելու համար ձեզ անհրաժեշտ կլինի էլեկտրաֆորեզի սնուցման սարք: Liuyi Biotechnology-ում մենք տրամադրում ենք մի շարք էլեկտրոֆորեզի սնուցման սարքեր բոլոր կիրառությունների համար: DYY-12 և DYY-12C մոդելները բարձր կայուն լարման և հոսանքի հետ կարող են բավարարել բարձր լարման պահանջների էլեկտրոֆորեզը: Այն ունի կանգառի, ժամանակի, VH-ի և քայլ առ քայլ կիրառման գործառույթ: Նրանք իդեալական են IEF-ի և ԴՆԹ-ի հաջորդականության էլեկտրոֆորեզի կիրառման համար: Ընդհանուր սպիտակուցների և ԴՆԹ-ի էլեկտրոֆորեզի կիրառման համար մենք ունենք DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 և այլն մոդելները, որոնք նաև էլեկտրոֆորեզի բջիջներով (տանկեր/խցիկներ) վաճառքի սնուցման սարքեր են: Դրանք կարող են օգտագործվել միջին և ցածր լարման էլեկտրոֆորեզի համար, օրինակ՝ դպրոցական լաբորատորիայի, հիվանդանոցային լաբորատորիայի և այլնի համար: Էլեկտրաէներգիայի մատակարարման այլ մոդելներ, խնդրում ենք այցելել մեր կայքը:

Liuyi ապրանքանիշն ունի ավելի քան 50 տարվա պատմություն Չինաստանում, և ընկերությունը կարող է կայուն և բարձրորակ արտադրանք ապահովել ամբողջ աշխարհում: Տարիների զարգացման ընթացքում այն ​​արժանի է ձեր ընտրությանը:

Մեր մասին լրացուցիչ տեղեկությունների համար դիմեք մեզ էլ[էլփոստը պաշտպանված է] or [էլփոստը պաշտպանված է].

Ինչ է պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը:
1. Karen Steward PhD Polyacrylamide gel electrophoresis, ինչպես է այն աշխատում, տեխնիկայի տարբերակները և դրա կիրառությունները