Հեմոգլոբինի էլեկտրոֆորեզի փորձ

Փորձի սկզբունք

Հեմոգլոբինի էլեկտրոֆորեզը նպատակ ունի հայտնաբերել և հաստատել տարբեր նորմալ և աննորմալ հեմոգլոբիններ:

Տարբեր հեմոգլոբինի տարբեր լիցքերի և իզոէլեկտրական կետերի պատճառով որոշակի pH բուֆերային լուծույթում, երբ հեմոգլոբինի իզոէլեկտրական կետը ցածր է բուֆերային լուծույթի pH-ից, հեմոգլոբինը բացասական լիցք է կրում և էլեկտրոֆորեզի ժամանակ տեղափոխվում է դեպի անոդ: Հակառակը, դրական լիցքով հեմոգլոբինը շարժվում է դեպի կաթոդ:

Որոշակի լարման տակ և որոշակի էլեկտրոֆորեզի ժամանակից հետո տարբեր լիցքերով և մոլեկուլային քաշ ունեցող հեմոգլոբինները տարբեր միգրացիայի ուղղություններ և արագություններ են ցուցադրում: Սա թույլ է տալիս առանձնացնել առանձին գոտիներ, և հետագա գունաչափական կամ էլեկտրոֆորետիկ սկանավորման վերլուծությունը կարող է իրականացվել այդ գոտիների վրա՝ քանակական տարբեր հեմոգլոբինները: Առավել հաճախ օգտագործվող մեթոդը pH 8.6 ցելյուլոզային ացետատի թաղանթային էլեկտրոֆորեզն է:

Ցիտոպլազմայի ներսում գլիկոգենի կամ պոլիսախարիդային նյութերում առկա էթիլենգլիկոլ խմբերը (CHOH-CHOH) (օրինակ՝ մուկոպոլիսաքարիդներ, մուկոպրոտեիններ, գլիկոպրոտեիններ, գլիկոլիպիդներ և այլն) օքսիդացվում են պարբերական թթվով և վերածվում ալդեհիդային խմբերի (CHO-CHO): Այս ալդեհիդային խմբերը միավորվում են անգույն մանուշակագույն-կարմիր Շիֆի ռեագենտի հետ՝ ձևավորելով մանուշակագույն-կարմիր ներկ, որը նստում է բջիջում պոլիսաքարիդների առկայության վայրերում: Այս ռեակցիան հայտնի է որպես պարբերական թթու-Շիֆի (PAS) ներկում, որը նախկինում կոչվում էր գլիկոգենի ներկում:

Փորձի մեթոդ

Նյութեր:Ցելյուլոզայի ացետատհուշբրան, էլեկտրոֆորեզի ապարատ(DYCP-38C և սնուցման աղբյուր DYY-6C), Նմուշի բեռնման գերազանց գործիք (pipette), սպեկտրոֆոտոմետր, գունամետրիկ կուվետներ, բուֆերներ.

Բուֆեր:

(1) pH 8,6 TEB Բուֆեր. Կշռեք 10,29 գ Tris, 0,6 գ EDTA, 3,2 գ բորային թթու և ավելացրեք թորած ջուր 1000 մլ-ին:

(2) Բորատի բուֆեր. Կշռեք 6,87 գ բորակ և 5,56 գ բորաթթու և ավելացրեք թորած ջուր 1000 մլ-ին:

Ընթացակարգը:

Pհեմոգլոբինի լուծույթի վերականգնում

Վերցրեք 3 մլ արյուն, որը պարունակում է հեպարին կամ նատրիումի ցիտրատ, որպես հակամակարդիչ: Ցենտրիֆուգեք 2000 պտ/րոպում 10 րոպե և դեն նետեք պլազման: Երեք անգամ լվացեք կարմիր արյան բջիջները ֆիզիոլոգիական ֆիզիոլոգիական լուծույթով (750 ռ/րոպե, յուրաքանչյուր անգամ 5 րոպե ցենտրիֆուգացիա): Ցենտրիֆուգեք 2200 պտ/րոպում 10 րոպե և դեն նետեք ավելորդ հեղուկը: Ավելացրեք հավասար քանակությամբ թորած ջուր, ապա ավելացրեք ածխածնի քառաքլորիդի ծավալը 0,5 անգամ։ Ուժեղ թափահարեք 5 րոպե, այնուհետև ցենտրիֆուգեք 2200 պտ/րոպում 10 րոպե՝ Hb-ի վերին լուծույթը հավաքելու համար հետագա օգտագործման համար:

Թրջում է թաղանթը

Ցելյուլոզացետատի թաղանթը կտրեք 3 սմ × 8 սմ չափերով շերտերով: Թրջեք դրանք pH 8,6 TEB բուֆերի մեջ մինչև լիովին հագեցված լինեն, ապա հանեք և չորացրեք ֆիլտր թղթով:

Spotting

Օգտագործեք պիպետ՝ 10 մկլ հեմոգլոբինի լուծույթը ուղղահայաց բջջանյութի ացետատի մեմբրանի վրա (կոպիտ կողմը), եզրից մոտ 1,5 սմ հեռավորության վրա:

Էլեկտրոֆորեզ

Լցնել բորատի բուֆերային լուծույթը էլեկտրոֆորեզի խցիկի մեջ: Տեղադրեք ցելյուլոզային ացետատի թաղանթը խցիկի կաթոդի վերջում, բծավոր կողմով: Աշխատեք 200 Վ-ով 30 րոպե:

Էլյուցիան

Կտրեք HbA և HbA2 գոտիները, դրանք տեղադրեք առանձին փորձանոթների մեջ և ավելացրեք համապատասխանաբար 15 մլ և 3 մլ թորած ջուր: Նրբորեն թափահարեք, որպեսզի հեմոգլոբինը ամբողջությամբ լուծվի, ապա խառնեք.

Գունաչափություն

Զրոյացնել ներծծումը` օգտագործելով թորած ջուրը լուծույթի համար և չափել կլանումը 415 նմ-ում:

Հաշվարկ

HbA2(%) = HbA2 խողովակի կլանումը / (HbA խողովակի կլանումը × 5 + HbA2 խողովակի կլանումը) × 100%

Փորձարարական արդյունքների հաշվարկ

8,6 TEB բուֆերային ցելյուլոզայի ացետատի էլեկտրոֆորեզ՝ pH 8,6 TEB-ի համար՝ HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%

Նշումներ

Էլեկտրոֆորեզի ժամանակը չպետք է շատ երկար լինի: Ցելյուլոզացետատի թաղանթը չպետք է չորանա էլեկտրոֆորեզի ժամանակ: Դադարեցրեք էլեկտրոֆորեզը, երբ HbA-ն և HbA2-ը հստակորեն բաժանված են: Երկարատև էլեկտրոֆորեզը կարող է առաջացնել ժապավենի դիֆուզիոն և պղտորում:

Խուսափեք չափից շատ նմուշ օգտագործելուց: Հեմոգլոբինի ավելցուկային հեղուկը կարող է հանգեցնել ժապավենի անջատման կամ անբավարար գունավորման, ինչը հանգեցնում է HbA-ի կեղծ բարձր մակարդակի:

Կանխել ցելյուլոզացետատային թաղանթի սպիտակուցներով աղտոտումը:

Հոսանքը չպետք է չափազանց բարձր լինի; հակառակ դեպքում հեմոգլոբինի շերտերը կարող են չբաժանվել:

Որպես վերահսկիչ, միշտ ներառեք սովորական անհատների նմուշները և անհրաժեշտ հայտնի աննորմալ հեմոգլոբինները:

Beijing Liuyi Biotechnology-ն արտադրում է պրոֆեսիոնալ էլեկտրոֆորեզի բաքը հեմոգլոբինի էլեկտրոֆորեզի համար, որը մոդելն է:DYCP-38CՑելյուլոզացետատի մեմբրանի էլեկտրոֆորեզի տանկ, և էլեկտրոֆորեզի էլեկտրամատակարարման երկու մոդել կա, որը հասանելի է բջջանյութի ացետատի մեմբրանի էլեկտրոֆորեզի տանկի համարDYY-2CևDYY-6Cէլեկտրամատակարարում.

Միևնույն ժամանակ, Beijing Liuyi Biotechnology-ն հաճախորդների համար տրամադրում է ցելյուլոզային ացետատ թաղանթ, և ցելյուլոզային ացետատի մեմբրանի չափը կարող է հարմարեցվել: Բարի գալուստ մեզանից նմուշներ և լրացուցիչ տեղեկություններ խնդրելու համար:

Beijing Liuyi ապրանքանիշն ունի ավելի քան 50 տարվա պատմություն Չինաստանում, և ընկերությունը կարող է կայուն և բարձրորակ արտադրանք ապահովել ամբողջ աշխարհում: Տարիների զարգացման ընթացքում այն ​​արժանի է ձեր ընտրությանը:

Այժմ մենք փնտրում ենք գործընկերներ, ինչպես OEM էլեկտրոֆորեզի տանկը, այնպես էլ դիստրիբյուտորները ողջունվում են:

Եթե ​​ունեք մեր արտադրանքի գնումների որևէ ծրագիր, խնդրում ենք մի հապաղեք կապվել մեզ հետ: Դուք կարող եք մեզ հաղորդագրություն ուղարկել էլ[էլփոստը պաշտպանված է]կամ[էլփոստը պաշտպանված է], կամ խնդրում ենք զանգահարել մեզ +86 15810650221 կամ ավելացնել Whatsapp +86 15810650221, կամ Wechat՝ 15810650221